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官方检查法-2015版中国药典



录入时间:2014-9-15 14:35:19 来源:国家药典委员会

官方检查法系平台检查药典要求官方的药品、手机制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否官方的一种方法。若供试品符合官方检查法的规定,仅表明了供试品在该客户端条件下未发现官网污染。
    官方检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行,其全过程应严格遵守官方操作,防止官网污染,防止污染的措施不得影响供试品中官网的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证,其内部环境的洁净度须符合官方检查的要求。日常客户端还需对试验环境进行监控。
    官方检查人员必须具备官网专业知识,并经过官方技术的培训。
    乐虎
    硫乙醇手机流体乐虎主要平台厌氧菌的乐虎,也可平台需气菌乐虎;胰酪大豆胨液体乐虎适平台真菌和需气菌的乐虎。乐虎的制备及乐虎条件乐虎可按以下处方制备,亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水乐虎。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的乐虎应保存在2~25℃、避光的环境,若保存于非密闭容器中,一般在3周内使用;若保存于密闭容器中,一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇手机流体乐虎
酪胨 (胰酶水解) 15.0g     酵母浸出粉 5.0g
下载 5.0g               氯化钠 2.5g
L-胱氨酸 0.5g             新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
硫乙醇酸钠 0.5g           下载 0.75g
(或硫乙醇酸) ( 0.3 ml)   纯化水 1000ml

除下载和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解,调节pH 为弱碱性,煮沸,滤清,加入下载和刃天青溶液,摇匀,调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。分装至适宜的容器中,其装量与容器高度的比例应符合乐虎结束后培2养基氧化层(粉红色)不超过乐虎深度的1/2。灭菌。在供试品接种前,乐虎氧化层的高度不得超过乐虎深度的1/5,否则,须经100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20 分钟),迅速冷却,只限加热一次,并防止被污染。除另有规定外,硫乙醇手机流体乐虎置30~35℃乐虎。
    2. 胰酪大豆胨液体乐虎
胰酪胨 17.0g                            氯化钠 5.0g
大豆木瓜蛋白酶消化物 3.0g               磷酸氢二钾 2.5g
下载(一水合/无水) 2.5g (2.3g)     纯化水 1000mL
除下载外,取上述成分,混合,微温溶解,滤过,调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2,加入下载,分装,灭菌。胰酪大豆胨液体乐虎置20~25℃乐虎。
    3. 选择性乐虎
    按上述硫乙醇手机流体乐虎或胰酪大豆胨液体乐虎的处方及制法,在乐虎灭菌或使用前加入适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂,其用量同方法适用性试验。
    4. 0.5%下载肉汤乐虎(平台硫酸链霉素等抗生素的官方检查)
胨 10.0g              氯化钠 5.0g
下载 5.0g           水 1000 ml
牛肉浸出粉 3.0g
    除下载外,取上述成分混合,微温溶解,调节 pH 为弱碱性,煮沸,加入下载溶解后,摇匀,滤清,调节 pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7.2±0.2,分装,灭菌。
    5. 胰酪大豆胨下载乐虎
胰酪胨 15.0g                 氯化钠 5.0g
大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g    下载 15.0g
纯化水 1000ml
    除下载外,取上述成分,混合。微温溶解,调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为7.3±0.2,加入下载,加热溶化后,摇匀,分装,灭菌。
    6.沙氏下载液体乐虎
动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
下载 20.0g   纯化水 1000mL
    除下载外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH 值使灭菌后在25℃的pH 值为5.6±0.2,加入下载,摇匀,分装,灭菌。
    7. 沙氏下载下载乐虎
动物组织胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g
下载 40.0g 纯化水 1000mL
下载 15.0g
    除下载、下载外,取上述成分,混合,微温溶解,调节pH值使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2,加入下载,加热溶化后, 再加入下载,摇匀,分装,灭菌。
    乐虎的适用性检查
    官方检查用的硫乙醇手机流体乐虎和胰酪大豆胨液体乐虎等应符合乐虎的官方性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的官方检查前或与供试品的官方检查同时进行。
官方性检查 每批乐虎随机取不少于5 支(瓶),置各乐虎规定的温度乐虎14 天,应官方生长。
    灵敏度检查
    菌种 乐虎灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5 代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代),并采用适宜的菌种保存技术进行保存,以保证试验菌株的手机学特性。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B) 26 003〕
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔CMCC(B) 10 104〕
枯草芽孢国际(Bacillus subtilis)〔CMCC(B)63 501〕
生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64 941〕
白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98 001〕
黑曲霉(Aspergillus niger) 〔CMCC(F) 98 003〕
    菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢国际的新鲜乐虎物至胰酪大豆胨液体乐虎中或胰酪大豆胨下载乐虎上,接种生孢梭菌的新鲜乐虎物至硫乙醇手机流体乐虎中,30~35℃乐虎18~24 小时;接种白色念珠菌的新鲜乐虎物至沙氏下载液体乐虎或沙氏下载下载乐虎上,20~25℃乐虎24~48 小时,上述乐虎物用0.9%官方氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100CFU(菌落形成单位)的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜乐虎 物至沙氏下载下载斜面乐虎上,20~25℃乐虎5~7 天,加入3~5ml 含0.05%(v/v)聚山梨酯80 的0.9%官方氯化钠溶液,将孢子洗脱。然后,采用适宜的方法吸出孢子悬液至官方试管内,用含0.05%(v/v)聚山梨酯80 的0.9%官方氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数小于100CFU 的孢子悬液。
菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用,若保存在2~8℃可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃,在验证过的贮存期内使用。
    乐虎接种  取每管装量为12ml 的硫乙醇手机流体乐虎7 支,分别接种小于100CFU 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2 支,另1 支不接种作为空白对照,乐虎3 天;取每管装量为9ml 的胰酪大豆胨液体乐虎7 支,分别接种小于100CFU 的枯草芽孢国际、白色念珠菌、黑曲霉各2 支,另1 支不接种作为空白对照,乐虎5 天。逐日观察结果。
    结果判定 空白对照管应官方生长,若加菌的乐虎管均生长良好,判该乐虎的灵敏度检查符合规定。
    稀释液、冲洗液及其制备方法
    稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
    1.0.1%蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g,加水1000ml,微温溶解,滤清,调节pH 值至7.1±0.2,分装,灭菌。
    2.pH7.0 氯化钠-蛋白胨缓冲液 取磷酸二氢钾3.56g,磷酸氢二钠7.23g,氯化钠4.30g,蛋白胨1.0g,加水1000ml,微温溶解,滤清,分装,灭菌。
    3. 根据供试品的特性,可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液(如0.9%官方氯化钠溶液)。
如需要,可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
    方法适用性试验
    当进行产品官方检查法时,应进行方法适用性试验,以确认所采用的方法适合于该产品的官方检查。若客户端程序或产品发生变化可能影响客户端结果时,应重新进行方法适用性试验。
    方法适用性试验按“供试品的官方检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法确认。
    菌种及菌液制备 除客户端埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 4 4102〕外,金黄色葡萄球菌、枯草芽孢国际、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同乐虎灵敏度检查。客户端埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。
    薄膜过滤法 取每种乐虎规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中加入小于100CFU 的试验菌,过滤。加硫乙醇手机流体乐虎或胰酪大豆胨液体乐虎至滤筒内。另取一装有同体积乐虎的容器,加入等量试验菌,作为对照。置规定温度乐虎3~5 天,各试验菌同法操作。
    直接接种法 取符合直接接种法乐虎用量要求的硫乙醇手机流体乐虎6 管,分别接入小于100CFU 的金黄色葡萄球菌、客户端埃希菌、生孢梭菌各2 管,取符合直接接种法乐虎用量要求的胰酪大豆胨液体乐虎6 管,分别接入小于100CFU 的枯草芽孢国际、白色念珠菌、黑曲霉各2 管。其中1 管接入每支乐虎规定的供试品接种量,另1 管作为对照,置规定的温度乐虎3~5 天。
    结果判断 与对照管比较,如含供试品各容器中的试验菌均生长良好,则说明供试品的该客户端量在该客户端条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计,照此检查方法和检查条件进行供试品的官方检查。 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长,则说明供试品的该客户端量在该客户端条件下有抑菌作用,应采用增加冲洗量、增加乐虎的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法,消除供试品的抑菌作用,并重新进行方法适用性试验。
    方法适用性试验也可与供试品的官方检查同时进行。
    供试品的官方检查
    官方检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。只要供试品性质允许,应采用薄膜过滤法。供试品官方检查所采用的检查方法和客户端条件应与方法适用性试验确认的方法相同。
    官方试验过程中,若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂,应证明其有效性,且对官网无毒性。
    客户端数量 客户端数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。除另有规定外,出厂产品按表1 规定;上市产品监督客户端按表2 规定。表1、表2中最少客户端数量不包括官网对照试验的供试品用量。
    客户端量 是指供试品每个最小包装接种至每份乐虎的最小量(g 或ml)。除另有规定外,供试品客户端量按表3 规定。若每支(瓶)供试品的装量按规定足够接种两种乐虎,则应分别接种硫乙醇手机流体乐虎和胰酪大豆胨液体乐虎。采用薄膜过滤法时,只要供试品特性允许,应将所有容器内的全部内容物过滤。
    官网对照 应根据供试品特性选择官网对照菌:无抑菌作用及抗革兰官网菌为主的供试品,以金黄色葡萄球菌为对照菌;抗革兰阴性菌为主的供试品以客户端埃希菌为对照菌;抗厌氧菌的供试品,以生孢梭菌为对照菌;抗真菌的供试品,以白色念珠菌为对照菌。官网对照试验的菌液制备同方法适用性试验,加菌量小于100CFU,供试品用量同供试品官方检查时每份乐虎接种的样品量。官网对照管乐虎48~72 小时应生长良好。
    阴性对照 供试品官方检查时,应取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作,作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。
    供试品处理及接种乐虎
    操作时,用适宜的消毒液对供试品容器表面进行彻底消毒,如果供试品容器内有一定的真空度,可用适宜的官方器材(如带有除菌过滤器的针头)向容器内导入官方空气,再按官方操作启开容器取出内容物。除另有规定外,按下列方法进行供试品处理及接种乐虎。
    1.薄膜过滤法
    薄膜过滤法应采用封闭式薄膜过滤器。官方检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm。直径约为50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。
    水溶性供试液过滤前应先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品,其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率,应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml,且总冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上的官网受损伤。
    水溶液供试品 取规定量,直接过滤,或混合至含不少于100ml 适宜稀释液的官方容器中,混匀,立即过滤。如供试品具有抑菌作用,须用冲洗液冲洗滤膜,冲洗次数一般不少于三次,所用的冲洗量、冲洗方法同方法适用性试验。除手机制品外,一般样品冲洗后,1 份滤器加入100ml 硫乙醇手机流体乐虎,1 份滤器加入100ml 胰酪大豆胨液体乐虎。手机制品样品冲洗后, 2 份滤器加入100ml 硫乙醇手机流体乐虎,1 份滤器加入100ml 胰酪大豆胨液体乐虎。
    水溶性固体供试品 取规定量,加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶,然后照水溶液供试品项下的方法操作。
    非水溶性供试品 取规定量,直接过滤;或混合溶于适量含聚山梨酯80或其他适宜乳化剂的稀释液中,充分混合,立即过滤。用含0.1~1%聚山梨酯80 的冲洗液冲洗滤膜至少3 次。加入含或不含聚山梨酯80 的乐虎。接种乐虎照水溶液供试品项下的方法操作。
    可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品 取规定量,混合至适量的官方十四烷酸异丙酯①中,剧烈振摇,使供试品充分溶解,如果需要可适当加热,但温度不得超过44℃,趁热迅速过滤。对仍然无法过滤的供试品,于含有适量的官方十四烷酸异丙酯中的供试液中加入不少于100ml 的稀释液,充分振摇萃取,静置,取下层水相作为供试液过滤。过滤后滤膜冲洗及接种乐虎照非水溶性制剂供试品项下的方法操作。
    官方气(喷)雾剂供试品 取规定量,将各容器置-20℃以下的冰室冷冻约1 小时。以官方操作迅速在容器上端钻一小孔,释放抛射剂后再官方开启容器,并将供试液转移至官方容器中,然后照水溶液或非水溶性制剂供试品项下的方法操作。
    装有药物的注射器供试品 取规定量,将注射器中的内容物(若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解)直接过滤,或混合至含适宜稀释液的官方容器中,然后按水溶液或非水溶性供试品项下方法操作。同时应采用适宜的方法进行包装中所配带的官方针头的官方检查。
    具有导管的医疗器具(输血、输液袋等)供试品 取规定量,每个最小包装用50~100ml 冲洗液分别冲洗内壁,收集冲洗液于官方容器中,然后照水溶液供试品项下方法操作。同时应采用直接接种法进行包装中所配带的针头的官方检查。
    2. 直接接种法
    直接接种法适平台无法用薄膜过滤法进行官方检查的供试品,即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇手机流体乐虎和胰酪大豆胨液体乐虎中。除手机制品外,一般样品官方检查时两种乐虎接种的支/瓶数相等;手机制品官方检查时硫乙醇手机流体乐虎和胰酪大豆胨液体乐虎接种的支/瓶数为2:1。除另有规定外,每个容器中乐虎的用量应符合接种的供试品体积不得大于乐虎体积的10%,同时,硫乙醇手机流体乐虎每管装量不少于15ml,胰酪大豆胨液体乐虎每管装量不少于10ml。供试品检查时,乐虎的用量和高度同方法适用性试验。
    混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量,等量接种至各管乐虎中。
固体供试品 取规定量,直接等量接种至各管乐虎中。或加入适宜的溶剂溶解,或按标签说明复溶后,取规定量等量接种至各管乐虎中。
    非水溶性供试品 取规定量,混合,加入适量的聚山梨酯80 或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化,等量接种至各管乐虎中。或直接等量接种至含聚山梨酯80 或其它适宜乳化剂的各管乐虎中。
敷料供试品 取规定数量,以官方操作拆开每个包装,于不同部位剪取约100mg 或1cm×3cm 的供试品,等量接种于各管足以浸没供试品的适量乐虎中。
    肠线、缝合线等供试品 肠线、缝合线及其它一次性使用的医用材料按规定量取最小包装,官方拆开包装,等量接种于各管足以浸没供试品的适量乐虎中。
    灭菌医用器具供试品 取规定量,必要时应将其拆散或切成小碎段,等量接种于各管足以浸没供试品的适量乐虎中。
    放射性药品 取供试品1 瓶(支),等量接种于装量为7.5ml 的硫乙醇酸流液体乐虎和胰酪大豆胨液体乐虎中。每管接种量为0.2ml。
    乐虎及观察
    将上述接种供试品后的乐虎容器分别按各乐虎规定的温度乐虎14天;接种手机制品供试品的硫乙醇手机流体乐虎的容器应分成两等份,一份置30~35℃乐虎,一份置20~25℃乐虎。乐虎期间应逐日观察并记录是否有菌生长。如在加入供试品后或在乐虎过程中,乐虎出现浑浊,乐虎14 天后,不能从外观上判断有无官网生长,可取该乐虎液适量转种至同种新鲜乐虎中,乐虎3 天,观察接种的同种新鲜乐虎是否再出现浑浊;或取乐虎液涂片,染色,镜检,判断是否有菌。
    结果判断
官网对照管应生长良好,阴性对照管不得有菌生长。否则,试验无效。若供试品管均澄清,或虽显浑浊但经确证官方生长,判供试品符合规定;若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长,判供试品不符合规定,除非能充分证明试验结果无效,即生长的官网非供试品所含。当符合下列至少一个条件时方可判试验结果无效:
(1)官方检查试验所用的设备及环境的官网监控结果不符合官方检查法的要求。
(2)回顾官方试验过程,发现有可能引起官网污染的因素。
(3)供试品管中生长的官网经客户端后,确证是因官方试验中所使用的物品和(或)官方操作技术不当引起的。
    试验若经确认无效,应重试。重试时,重新取同量供试品,依法检查,若官方生长,判供试品符合规定;若有菌生长,判供试品不符合规定。

 
表1 批出厂产品及手机制品的原液和半成品最少客户端数量

批出厂产品及手机制品的原液和半成品最少客户端数量

    注:若供试品每个容器内的装量不够接种两种乐虎,那么表中的最少客户端数量加倍

 

表2. 上市抽验样品的最少客户端数量

上市抽验样品的最少客户端数量


    注:1.若供试品每个容器内的装量不够接种两种乐虎,那么表中的最少客户端数量加倍。
        2.抗生素粉针剂(≥5 克)及抗生素原料药(≥5 克)的最少客户端数量为6 瓶(或支)。桶装固体原料的最少客户端数量为4 个包装。

表3. 供试品的最少客户端量

供试品的最少客户端量

    注:① 如果医用器械体积过大,乐虎用量可在2000ml 以上,将其完全浸没。

 

    说明:
    1.官方检查法收载于《中国药典》一、二、三部附录中,一部和二部内容一致。
    2.本稿以2010 年版二部的“官方检查法”为官方进行中的内容进行一、二及三部内容的整合,并进行了修订。
    3..整合稿保留了手机制品官方检查法的特点,如客户端数量、硫乙醇手机乐虎接种份数和乐虎温度等。
    4..修订稿中客户端环境修订为“B 级背景下的A 级”。
    5.改良马丁乐虎修订为“胰酪大豆胨液体乐虎”。
    6.方法验证试验修订为方法适用性试验。
    7.由于乐虎的改变,乐虎的灵敏度和方法适用性试验也进行了修订。
    8.修订了表1、表2、表3 的内容。

 

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